Thermo Fisher Attune CytPix

Назначение

Thermo Fisher Attune CytPix - проточный цитометр-анализатор, объединяющий классическую флуоресцентную проточную цитометрию с визуализацией клеток в потоке. Система построена на платформе Attune NxT с акустической фокусировкой, но дополнена встроенной камерой для brightfield и флуоресцентных изображений каждой клетки. Оператор получает не только стандартные параметры (FSC, SSC, флуоресценция), но и визуальное подтверждение морфологии.

Место в линейке

CytPix - старшая модель в линейке анализаторов Attune. Младшая модель Attune NxT даёт те же аналитические возможности (4 лазера, 16 каналов, акустическая фокусировка), но без камеры визуализации.

CytPix - это не imaging flow cytometer в классическом смысле (как Luminex ImageStreamX). Это прежде всего быстрый классический цитометр с добавленной функцией визуализации для верификации результатов.

Принцип работы

Клетки фокусируются акустической волной в центральной оси потока и проходят через зону лазерного облучения. Флуоресценция регистрируется ФЭУ через полосовые фильтры (до 16 каналов), как в обычном цитометре.

Одновременно высокоскоростная камера захватывает brightfield и флуоресцентные изображения каждой клетки в фокальной плоскости объектива. Точная акустическая фокусировка критически важна для резкости изображений.

Позиция на рынке

CytPix занимает отличительную нишу между классическими анализаторами и специализированными imaging flow cytometers. ImageStreamX предоставляет многоканальные высокоразрешающие изображения, но работает в 10-30 раз медленнее. CytPix предлагает "достаточную" визуализацию при полной скорости классического цитометра.

BD FACSDiscover S8 с CellView - единственный конкурент с визуализацией, но это значительно более дорогая спектральная система с сортировкой.

Ключевые технологии

Акустическая фокусировка

Пьезоэлектрический элемент генерирует ультразвуковую стоячую волну, выстраивающую клетки в центральной оси потока. Скорость подачи образца - до 35 мкл/сек при стабильном качестве данных.

Точная фокусировка критически важна для работы камеры: клетки проходят строго через фокальную плоскость объектива. Без акустической фокусировки визуализация на высокой скорости была бы невозможна.

Встроенная камера визуализации

Высокоскоростная камера в оптическом тракте цитометра. Разрешение достаточно для идентификации клеточной морфологии: форма клетки, наличие ядра, гранулярность, агрегаты.

Поддерживается захват brightfield (светлопольных) и флуоресцентных изображений. Флуоресцентная визуализация даёт возможность различить поверхностное окрашивание от ядерного.

Визуализация по запросу (image-based gating)

CytPix не обязательно фотографирует каждую клетку. Оператор настраивает селективный захват: например, только клетки в определённом гейте. Это снижает объём данных и даёт возможность сосредоточиться на интересующих популяциях.

При захвате изображений всех событий из 100 000 клеток формируется файл в несколько гигабайт. Рабочая станция с SSD-накопителем предпочтительна.

AI-ассистированный анализ изображений

Алгоритмы машинного обучения автоматически классифицируют изображения. AI надёжно распознаёт типичные артефакты: дебрис, пузырьки, агрегаты. Для нестандартных клеточных типов может потребоваться дообучение модели.

AI-классификатор снижает субъективность анализа и ускоряет обработку результатов. Это помощник, а не замена экспертного суждения.

Объёмный подсчёт

Встроенный перистальтический насос даёт точный объёмный подсчёт клеток без калибровочных бус. Функция унаследована от платформы Attune NxT.

Для кого подходит

• Детекция редких событий - CTC, MRD; визуализация даёт возможность верифицировать каждое редкое событие и исключить ложноположительные (дебрис, агрегаты)
• Онкология и патология - верификация морфологии опухолевых клеток в потоке без микроскопии мазков
• Фагоцитоз и интернализация - визуализация захвата частиц клетками; видно, находится ли частица внутри клетки или на поверхности
• Контроль качества клеточных препаратов - идентификация агрегатов, дебриса и нежизнеспособных клеток по морфологии
• Иммунология - визуальное подтверждение фенотипических данных; верификация того, что клетки в гейте соответствуют ожидаемой морфологии
• Микробиология - визуализация бактерий, ассоциированных с клетками, верификация внутриклеточных патогенов
• Апоптоз и клеточная гибель - визуализация блеббинга мембраны, конденсации ядра одновременно с флуоресцентными маркерами (Annexin V, PI)
• Образование и тренинг - начинающие операторы видят, что стоит за точками на графике, и быстрее осваивают принципы гейтирования

Особенности эксплуатации

ПО

Attune CytPix Software - расширенная версия Attune NxT Software с модулями визуализации и AI-анализа. Включает стандартные инструменты проточной цитометрии (настройка, компенсация, гейтирование, экспорт FCS 3.1), галерею изображений с привязкой к гейтам и AI-классификатор.

Два сценария работы: стандартный анализ с фоновым захватом изображений для верификации, или целенаправленный image-based анализ с визуальными критериями классификации.

Установка

• Форм-фактор: настольный (крупнее Attune NxT из-за камеры)
• Температура: 18-25°C
• Электропитание: стандартная сеть
• Рекомендуется рабочая станция с SSD и большим объёмом хранилища
• Специальных помещений не требуется

Обслуживание

Калибровка выполняется стандартными калибровочными бусами (как Attune NxT). Калибровка камеры - автоматическая при запуске ПО, вмешательства оператора не требует.

Расходные материалы: Attune Focusing Fluid (специализированная шитовая жидкость для акустической фокусировки), промывочный раствор, калибровочные бусы. Использование неоригинальной шитовой жидкости не допускается.

Обучение

Базовое обучение от Thermo Fisher занимает 2-3 дня (аналогично Attune NxT). Дополнительно требуется освоение модулей визуализации и AI-анализа. Для полноценного использования image-based gating нужен опыт интерпретации клеточной морфологии.

Ограничения

• Только анализ, функция сортировки отсутствует
• 16 каналов - уступает спектральным системам по числу маркеров
• Не заменяет специализированные imaging flow cytometers (ImageStreamX) для задач многоканальной высокоразрешающей визуализации
• Объём данных при сплошном захвате изображений может составлять десятки гигабайт за эксперимент
• Специализированная шитовая жидкость Attune Focusing Fluid - расходная статья, которую необходимо закладывать в бюджет