BD LSRFortessa X-20
Высокопроизводительный исследовательский проточный цитометр-анализатор с возможностью установки до 5 лазеров (355, 405, 488, 561, 640 нм) и детекцией до 20 параметров. Предназначен для многоцветного иммунофенотипирования, оснащён опциональным модулем High Throughput Sampler (HTS) для считывания планшетов. Программное обеспечение - BD FACSDiva.
ООО «Спин Аналитика» не осуществляет продажу оборудования. Платформа является информационно-навигационным сервисом.
Ключевые характеристики
| Тип | Высокопроизводительный исследовательский проточный цитометр-анализатор |
| Лазеры | До 5: 355 нм (УФ), 405 нм (фиолетовый), 488 нм (синий), 561 нм (жёлто-зелёный), 640 нм (красный) |
| Sheath-жидкость | Внешний резервуар, BD FACS Flow рекомендован |
| Формат экспорта | FCS 3.1 |
| Проточная ячейка | Кварцевая кювета с гидродинамической фокусировкой |
| Скорость анализа | До 20 000+ событий/сек |
| Контроль качества | BD CS&T (Cytometer Setup and Tracking), Application Settings |
| Параметры детекции | До 20 (18 FL + FSC + SSC) |
| Совместимые красители | BD Horizon Brilliant Violet (BV), BD OptiBuild BUV, стандартные (FITC, PE, APC и др.) |
| Оптическая архитектура | Модульная (сменные фильтры), octagon/trigon детекторные блоки |
| Автоматическая загрузка | Опциональный HTS (High Throughput Sampler) - 96/384-луночные планшеты |
| Программное обеспечение | BD FACSDiva |
Описание
Назначение
BD LSRFortessa X-20 - исследовательский проточный цитометр высокого класса с одновременной детекцией до 20 параметров. Прибор занимает нишу между рутинными анализаторами и сверхвысокопараметрическими системами.
Место в линейке
LSRFortessa X-20 располагается между FACSCanto II / FACSLyric (рутинные анализаторы) и FACSymphony (максимальное число параметров). Это оптимальный баланс между количеством параметров, надёжностью и стоимостью владения.
Прибор предназначен для задач, выходящих за рамки базового иммунофенотипирования: глубокий анализ субпопуляций иммунных клеток, многоцветные панели с 12-18 маркерами, анализ редких популяций. Наличие жёлто-зелёного лазера 561 нм - ключевое отличие от FACSCanto II.
Принцип работы
Клетки проходят через лазерные лучи в кварцевой проточной кювете с гидродинамической фокусировкой. Каждый лазер имеет выделенную оптическую платформу (octagon или trigon) с набором дихроичных зеркал и полосовых фильтров.
Фотоумножители (PMT) регистрируют флуоресценцию через узкополосные фильтры. Это классическая конвенциональная детекция: один фильтр - один канал - один флуорохром. Матричная компенсация корректирует перетоки сигнала между каналами.
Позиция на рынке
LSRFortessa X-20 - одна из наиболее распространённых платформ в коровых цитометрических лабораториях. Огромная установленная база, обширная библиотека протоколов и совместимость с экосистемой BD (реагенты BUV/BV, CS&T, FACSDiva) обеспечивают устойчивый спрос.
Появление спектральных анализаторов (Cytek Aurora, Sony ID7000) не вытеснило LSRFortessa X-20. Для лабораторий с устоявшимися панелями до 18-20 маркеров конвенциональная детекция по-прежнему надёжна и полностью валидирована.
Ключевые технологии
Лазерная система
| Лазер | Длина волны | Основные красители |
|---|---|---|
| УФ | 355 нм | BUV395, BUV496, BUV563, BUV661, BUV737, BUV805 |
| Фиолетовый | 405 нм | BV421, BV510, BV605, BV711, BV786 |
| Синий | 488 нм | FITC, PerCP-Cy5.5, BB515 |
| Жёлто-зелёный | 561 нм | PE, PE-CF594, PE-Cy5, PE-Cy7, mCherry, tdTomato |
| Красный | 640 нм | APC, APC-Cy7, Alexa 700 |
Пятилазерная конфигурация покрывает практически весь спектр доступных флуорохромов. УФ-лазер 355 нм необходим для серии BUV, которая добавляет 4-6 каналов с минимальным спиллингом в другие лазерные линии.
Жёлто-зелёный лазер 561 нм оптимально возбуждает PE, PE-тандемы и красные флуоресцентные белки. Конкретный набор лазеров определяется при заказе, минимальная конфигурация - 3 лазера.
Модульная оптическая архитектура
В отличие от FACSCanto II и FACSLyric с фиксированной оптикой, LSRFortessa X-20 позволяет заменять оптические фильтры в держателях. Это даёт возможность оптимизировать конфигурацию под конкретную панель флуорохромов.
Примеры адаптации: сузить полосу фильтра для снижения спиллинга, добавить канал для нового красителя, перенастроить под альтернативную панель. До 18 флуоресцентных каналов + FSC + SSC.
Кварцевая проточная кювета
Гидродинамическая фокусировка формирует стабильный ламинарный поток. Кюветная технология минимизирует образование аэрозолей и снижает фоновый шум по сравнению с jet-in-air системами.
Скорость анализа - до 20 000+ событий в секунду.
High Throughput Sampler (HTS)
Опциональный модуль для автоматического считывания 96- и 384-луночных планшетов. HTS выполняет автоматическую промывку между лунками, контролирует объём аспирации и скорость потока.
Производительность - до 96 образцов за 30-40 минут (зависит от числа собираемых событий). Модуль критически важен для скрининговых задач, где ручная загрузка пробирок непрактична.
Система контроля качества CS&T
BD Cytometer Setup and Tracking (CS&T) обеспечивает стабильность результатов во времени. Калибровочные бусы используются для ежедневной проверки и отслеживания долгосрочных трендов.
Application Settings позволяют сохранять и восстанавливать настройки прибора для конкретных экспериментов. Это упрощает воспроизведение протоколов и стандартизацию между операторами.
Для кого подходит
- Коровые цитометрические лаборатории - основной рабочий прибор для многоцветного анализа, обслуживающий множество исследовательских групп
- Иммунология и иммуноонкология - глубокое фенотипирование иммунных клеток с панелями из 12-18 маркеров, анализ T-клеточных субпопуляций, B-клеточного созревания, NK-клеток
- Онкология - фенотипирование опухолевого микроокружения, анализ иммунных инфильтратов, выявление редких циркулирующих опухолевых клеток
- Вакцинология - мониторинг иммунного ответа, анализ антиген-специфичных T-клеток (тетрамеры + функциональные маркеры)
- Скрининг - анализ библиотек клонов, скрининг лекарственных соединений, масштабные иммуномониторинговые исследования при использовании HTS
- Стволовые клетки - характеристика клеточных популяций по множеству маркеров дифференцировки
Особенности эксплуатации
Программное обеспечение
BD FACSDiva - профессиональная платформа, стандарт BD для исследовательских задач. Поддерживает создание сложных протоколов с иерархическим гейтированием, автоматическую компенсацию (до 18 цветов), batch-анализ.
Данные экспортируются в формате FCS 3.1. Полная совместимость с FlowJo, OMIQ, Cytobank и другими программами продвинутого анализа (tSNE, UMAP, автоматическая кластеризация).
Установка
- Форм-фактор: полноразмерный настольный
- Температура: 18-25°C, стабильная (колебания влияют на лазеры и оптику)
- Грузоподъёмность стола: достаточная для прибора и рабочей станции
- Электропитание: стандартная сеть
- Выделенный компьютер с BD FACSDiva
Обслуживание
Ежедневная подготовка: включение прибора, прогрев лазеров (20-30 минут для УФ-лазера), процедура CS&T с калибровочными бусинами (15-20 минут), промывка fluidics. Полный startup - около 45-60 минут.
Процедура shutdown обязательна: промывка линий, дегазация, выключение лазеров в определённом порядке. Несоблюдение процедур быстро приводит к деградации качества данных.
Расходные материалы:
- Sheath-жидкость (BD FACS Flow, внешний резервуар)
- Калибровочные бусы CS&T
- Промывочные растворы
- Замена лазеров при деградации (особенно УФ)
Обучение
Базовое обучение от BD занимает 3-5 дней. Рекомендуется наличие квалифицированного цитометриста, ответственного за прибор.
Компенсация многоцветных панелей (15+ маркеров) - нетривиальная задача. Необходимо тщательное планирование панелей с учётом спиллинга. Инструмент BD Horizon Dye Selection Tool помогает в подборе красителей.
Ограничения
- Только анализ, функция сортировки отсутствует
- Конвенциональная детекция ограничена ~18-20 параметрами (спектральные системы дают 40+)
- Компенсация многоцветных панелей сложнее, чем спектральное размешивание
- Стоимость владения выше, чем у FACSCanto II: сервисные контракты, замена лазеров
- Для рутинных задач с 4-6 маркерами прибор избыточен
Области применения
Сравнение с аналогами
Cytek Aurora - спектральный анализатор с 3-5 лазерами, детектирующий до 64 флуоресцентных параметров благодаря спектральному разложению вместо фильтров. Aurora значительно превосходит LSRFortessa X-20 по числу одновременно детектируемых параметров (до 40+ маркеров на практике vs ~18 у X-20). Преимущество Aurora - масштабируемость панелей и возможность использовать флуорохромы с перекрывающимися спектрами. Преимущество LSRFortessa X-20 - проверенная конвенциональная платформа с огромной базой протоколов, предсказуемая компенсация, меньшая зависимость от качества referenceных контролей.
Sony ID7000 - спектральный анализатор высшего класса с до 7 лазерами и детекцией до 184 флуоресцентных параметров (теоретически). На практике позволяет строить панели из 40+ маркеров. ID7000 представляет следующее поколение цитометрии, однако требует значительного опыта в спектральном анализе и дизайне панелей. LSRFortessa X-20 - более зрелая и доступная платформа с предсказуемым поведением, но с ограничением по числу параметров.
CytoFLEX LX - конвенциональный анализатор с до 6 лазерами (355, 375, 405, 488, 561, 638 нм) и до 21 FL каналом. Прямой конкурент LSRFortessa X-20 в сегменте высокопараметрических конвенциональных анализаторов. CytoFLEX LX использует лавинные фотодиоды (APD) вместо фотоумножителей (PMT), что обеспечивает более высокую квантовую эффективность. LSRFortessa X-20 выигрывает обширнейшей экосистемой BD (реагенты BUV/BV, FACSDiva, CS&T) и наибольшей установленной базой.
Частые вопросы
В чём принципиальное отличие LSRFortessa X-20 от FACSCanto II, помимо числа каналов?
Ключевые отличия: до 5 лазеров (vs 3 у Canto II), включая УФ 355 нм и жёлто-зелёный 561 нм - они открывают целые семейства красителей (BUV для УФ, оптимальное возбуждение PE-тандемов и красных белков для 561 нм). Модульная оптика позволяет менять фильтры под задачу (vs фиксированные у Canto II). HTS-модуль для планшетов отсутствует у Canto II. LSRFortessa - прибор для панелей более 8 маркеров и сложных исследовательских задач, тогда как Canto II - для рутинных клинико-исследовательских протоколов.
Нужен ли УФ-лазер 355 нм - можно ли обойтись 4 лазерами?
Зависит от задач. УФ-лазер необходим для красителей серии BD BUV (BUV395, BUV496, BUV563, BUV661, BUV737, BUV805), которые добавляют 4-6 каналов с минимальным спиллингом в другие лазерные линии. Для панелей до 12-14 маркеров зачастую можно обойтись 4 лазерами (405, 488, 561, 640). Для панелей 15-20 маркеров УФ-лазер практически незаменим - без BUV-красителей невозможно построить панель такой размерности с приемлемым уровнем спиллинга.
Как LSRFortessa X-20 соотносится со спектральными анализаторами?
LSRFortessa X-20 использует конвенциональную детекцию с фильтрами, спектральные анализаторы (Cytek Aurora, BD FACSymphony A5 SE) разлагают весь спектр эмиссии. Спектральные системы различают больше флуорохромов при том же числе лазеров и используют автофлуоресценцию как отдельный параметр. LSRFortessa X-20 остаётся актуальным: огромная база протоколов, предсказуемая компенсация, отработанные панели, меньшая вычислительная сложность. Для лабораторий с устоявшимися панелями до 18-20 маркеров конвенциональная детекция надёжна и валидирована.
Дополнительные материалы
Коды для госзакупок
Возможные коды ОКПД2 для закупки данного оборудования по 44-ФЗ и 223-ФЗ. Выбор кода зависит от назначения и контекста закупки.
Коды КТРУ регулярно обновляются Минфином и зависят от конкретных характеристик закупаемого оборудования (автоматическое/полуавтоматическое, с охлаждением/без и т.д.). Актуальные коды КТРУ доступны только в Единой информационной системе закупок.
Информация о кодах ОКПД2 носит справочный характер. Коды приведены в качестве примера возможных вариантов классификации данного оборудования. Выбор кода, его соответствие нормативно-правовым актам и целесообразность применения определяются заказчиком самостоятельно. ООО «Спин Аналитика» не несёт ответственности за некорректное применение указанных кодов при осуществлении закупочных процедур.