Roche LightCycler 480 II
Система qPCR с ксеноновой лампой и CCD-детектором для одновременного считывания всех лунок. Форматы 96 и 384. До 6 каналов детекции. Высокоскоростной термоциклер (Пельтье + серебряный блок), High Resolution Melting (HRM) для генотипирования.
ООО «Спин Аналитика» не осуществляет продажу оборудования. Платформа является информационно-навигационным сервисом.
Ключевые характеристики
| HRM | Шаг 0.02°C, непрерывное считывание |
| Тип | Система qPCR (ксенон + CCD) |
| Детектор | CCD-матрица (одновременное считывание всех лунок) |
| Форматы блоков | 96 и 384 (отдельные модели) |
| Скорость нагрева | До 4.8°C/с |
| Оптические каналы | До 6 (фильтры: 440-610 нм возбуждение, 488-670 нм эмиссия) |
| Равномерность блока | 0.4°C (серебряный блок) |
| Скорость считывания | Все лунки одновременно (<1 с) |
| Источник возбуждения | Ксеноновая лампа высокой интенсивности |
| Точность температуры | 0.2°C |
| Динамический диапазон | 10 порядков (до 10^10 копий) |
| Программное обеспечение | LightCycler 480 Software (Windows) |
Описание
Назначение
Roche LightCycler 480 II - система ПЦР в реальном времени с ксеноновой лампой и CCD-детектором, предназначенная для высокопроизводительного количественного анализа нуклеиновых кислот.
Место в линейке
LightCycler 480 II - мультиплановая система Roche. В линейке также: LightCycler 96 (базовый, 96 лунок, LED-оптика), LightCycler 2.0 (капилляр, архивный). Для клинической диагностики Roche предлагает cobas серию (IVD-сертифицированные системы).
LightCycler 480 II - исследовательская платформа, не IVD. Для диагностики используются cobas-системы с замкнутой экосистемой реагентов.
Принцип работы
Ксеноновая лампа высокой интенсивности генерирует широкополосное излучение. Фильтры выделяют нужную длину волны возбуждения. Эмиссия от всех лунок одновременно фокусируется на CCD-матрицу через оптическую систему.
CCD-детектор регистрирует флуоресценцию со всех лунок за одну экспозицию (нет сканирования, нет оптоволокна). Время считывания - менее 1 секунды для любого формата.
Позиция на рынке
LightCycler 480 II - одна из старейших и наиболее цитируемых qPCR-платформ в научной литературе. Установленная база превышает 20 000 приборов. Основные конкуренты: QuantStudio 5/7 Pro, Bio-Rad CFX Opus. Ключевое преимущество - зрелость платформы, обширная библиотека протоколов и реагенты Roche (Universal ProbeLibrary, LightMix).
Ключевые технологии
Ксеноновая лампа + CCD-детектор
Ксеноновая лампа покрывает весь видимый диапазон. В отличие от LED (узкополосные, требуют отдельного источника на канал), одна лампа работает со всеми красителями. CCD-матрица снимает "фотографию" флуоресценции со всех лунок одновременно.
Преимущество: абсолютная одновременность считывания (нет временного разброса между первой и последней лункой). Недостаток: лампа деградирует (~2000-3000 часов ресурса).
Серебряный блок
Алюминиевый блок с серебряным покрытием обеспечивает высокую скорость нагрева (~4.8°C/с) и равномерность температуры. Аналогично Eppendorf Mastercycler X50.
High Resolution Melting (HRM)
LightCycler 480 II - одна из лучших платформ для HRM-анализа. После амплификации температура плавно поднимается с шагом 0.02°C, и флуоресценция регистрируется с высоким разрешением. Различия в кривых плавления идентифицируют SNP, мутации и метилирование.
Модуль Gene Scanning в ПО LightCycler 480 автоматически кластеризует образцы по генотипам.
Мультивеллный формат 384
Блок 384 лунок снижает объём реакции до 5-20 мкл и увеличивает пропускную способность в 4 раза. CCD-система одинаково эффективно считывает и 96, и 384 лунки.
Universal ProbeLibrary (UPL)
Система из 165 коротких флуоресцентных зондов (8-9 нуклеотидов, LNA-модифицированных), которые покрывают >99% транскриптома. Пользователь заказывает только праймеры, зонды берутся из библиотеки. Существенно сокращает время и стоимость разработки новых qPCR-эссе.
Для кого подходит
- Исследовательские институты - одна из самых цитируемых qPCR-платформ, обширная библиотека публикаций
- Генотипирование (HRM) - высокоразрешающий анализ кривых плавления для SNP без зондов
- Скрининг экспрессии генов - 384-луночный формат для крупных экспериментов
- Фармацевтический R&D - масштабный скрининг мишеней, валидация биомаркёров
- Онкология - детекция соматических мутаций (KRAS, BRAF, EGFR) через HRM
- Ветеринария и агрономия - массовый скрининг патогенов в 384 формате
Особенности эксплуатации
Программное обеспечение
LightCycler 480 Software - управление и анализ. Модули: Abs Quant (абсолютная количественная оценка), Rel Quant (относительная), Gene Scanning (HRM), Genotyping, Tm Calling, End Point Genotyping. Экспорт в TXT, PDF.
Требования к установке
- Форм-фактор: настольный (крупнее QuantStudio/CFX)
- Компьютер: Windows PC (отдельный)
- Электропитание: 100-240 В
- Прогрев лампы: ~5 минут
Обслуживание и расходные материалы
- Ксеноновая лампа: ресурс ~2000-3000 часов, замена - сервисный инженер ($500-800)
- Планшеты: Roche LightCycler 480 Multiwell (96/384), специфичные для прибора
- Калибровка: ежегодная (спектральная калибровка CCD)
- CCD-детектор: рассчитан на весь срок службы прибора
Обучение
Базовое: 2-3 дня. HRM-анализ требует дополнительного обучения (интерпретация кривых, дизайн ампликонов).
Ограничения
- Ксеноновая лампа деградирует (замена каждые 2-3 года при интенсивной работе)
- Планшеты Roche дороже универсальных MicroAmp
- ПО LightCycler 480 сложнее в освоении, чем CFX Maestro или QDAS
- Нет облачной платформы (в отличие от QuantStudio Connect и BR.io)
- Модель не обновлялась с 2010 г. (зрелая, но не современная платформа)
Области применения
Сравнение с аналогами
QuantStudio 5 - LED-оптика (5 каналов), только 96 лунок. LightCycler 480 II - ксенон + CCD, 96 или 384 лунок, лучший HRM. QuantStudio 5 - современнее (LED не деградирует, облачная платформа), дешевле в обслуживании. LightCycler 480 II - шире по формату (384) и превосходит в HRM-анализе.
CFX Opus 96 - оптоволоконная детекция, 6 каналов, только 96 лунок. LightCycler 480 II - CCD-детекция, также одновременное считывание, но доступен в 384-луночном формате. CFX Opus - более современная оптика с лучшей равномерностью (<2% CV). LightCycler 480 II - лучше для HRM и высокой пропускной способности (384).
QuantStudio 7 Pro - LED-оптика с 6 каналами, сменные блоки 96/384, 21 CFR Part 11, облачная аналитика. Превосходит LightCycler 480 II по модульности (сменные блоки), регуляторным возможностям и современности платформы. LightCycler 480 II выигрывает HRM-анализом и зрелой экосистемой UPL.
Частые вопросы
Почему LightCycler 480 II до сих пор популярен, если модели 2010 года?
Три причины: (1) огромная установленная база и библиотека публикаций - лаборатории предпочитают цитировать проверенную платформу; (2) отличная HRM-производительность - одна из лучших на рынке; (3) экосистема UPL и реагентов Roche. Модель зрелая, но функционально не уступает большинству задач. Для новых лабораторий QuantStudio или CFX Opus предлагают LED-оптику без деградации и облачную аналитику.
Можно ли использовать неоригинальные планшеты?
Технически - да, но с оговорками. Планшеты Roche оптимизированы под оптическую систему LightCycler 480 (автофлуоресценция пластика, оптическая прозрачность). Неоригинальные планшеты могут повысить фоновую флуоресценцию и снизить чувствительность. Для HRM нужны оригинальные планшеты Roche (высокая чувствительность к фоновой флуоресценции).
Что такое Universal ProbeLibrary (UPL)?
Библиотека из 165 коротких LNA-зондов (8-9 нуклеотидов), покрывающих >99% транскриптома. Онлайн-дизайнер подбирает зонд из библиотеки и праймеры. Пользователь заказывает только праймеры (дешевле и быстрее, чем заказ полного TaqMan-зонда). Библиотека одноразово закупается и используется для сотен экспериментов.
Дополнительные материалы
Коды для госзакупок
Возможные коды ОКПД2 для закупки данного оборудования по 44-ФЗ и 223-ФЗ. Выбор кода зависит от назначения и контекста закупки.
Коды КТРУ регулярно обновляются Минфином и зависят от конкретных характеристик закупаемого оборудования (автоматическое/полуавтоматическое, с охлаждением/без и т.д.). Актуальные коды КТРУ доступны только в Единой информационной системе закупок.
Информация о кодах ОКПД2 носит справочный характер. Коды приведены в качестве примера возможных вариантов классификации данного оборудования. Выбор кода, его соответствие нормативно-правовым актам и целесообразность применения определяются заказчиком самостоятельно. ООО «Спин Аналитика» не несёт ответственности за некорректное применение указанных кодов при осуществлении закупочных процедур.