Thermo Fisher Scientific Bigfoot Spectral Cell Sorter
Высокопараметрический спектральный клеточный сортер с CCD-детекцией, поддержкой до 7 лазеров и более 60 детекторов. 6-позиционная сортировка со скоростью до 70 000 событий/сек. Объединяет возможности спектральной цитометрии и высокоскоростной jet-in-air сортировки.
ООО «Спин Аналитика» не осуществляет продажу оборудования. Платформа является информационно-навигационным сервисом.
Ключевые характеристики
| Тип | Спектральный jet-in-air клеточный сортер |
| Сопло | 70, 85, 100 мкм (сменное) |
| Лазеры | До 7: 355, 405, 488, 532, 561, 594, 640 нм |
| Детекторы | Более 60 каналов (CCD-спектральная детекция, 360-900 нм) |
| Биобезопасность | Опциональный модуль аэрозольной защиты |
| Скорость анализа | До 100 000 событий/сек |
| Режимы сортировки | 2-way, 4-way, 6-way; пробирки, планшеты 96/384 |
| Скорость сортировки | До 70 000 событий/сек |
| Технология сортировки | Jet-in-air, электростатическое отклонение капель |
| Требования к помещению | Выделенное помещение от 15-20 м2, вытяжная вентиляция, стабильная температура |
| Программное обеспечение | Sasquatch |
| Спектральное размешивание | Автоматическое, в реальном времени (Sasquatch) |
Описание
Назначение
Bigfoot Spectral Cell Sorter - первый коммерческий клеточный сортер, объединивший полноспектральную CCD-детекцию с высокоскоростной jet-in-air сортировкой. Система разработана Thermo Fisher Scientific (на базе технологий Propel Labs) для центров, работающих с панелями из десятков маркеров и нуждающихся в физическом выделении клеточных популяций.
Место в линейке
Bigfoot - единственный сортер в линейке Thermo Fisher с полноспектральной детекцией. Анализаторы Attune NxT и Attune CytPix используют классическую фильтровую детекцию и не имеют функции сортировки.
Bigfoot стал ответом на запрос исследователей, которые работали со спектральными анализаторами (Cytek Aurora, Sony SA3800), но не имели возможности отсортировать идентифицированные популяции.
Принцип работы
Спектральная детекция: CCD-матрицы регистрируют полный спектр эмиссии в диапазоне 360-900 нм (более 60 каналов). Алгоритм spectral unmixing разделяет вклады отдельных флуорохромов математически.
Сортировка: классический jet-in-air механизм с формированием капель и электростатическим отклонением. Скорость до 70 000 событий/сек, 6-позиционная сортировка. Сопла 70, 85, 100 мкм.
Позиция на рынке
Bigfoot конкурирует с Cytek Aurora CS в классе спектральных сортеров. Aurora CS использует APD-детекторы и имеет более развитую экосистему. Bigfoot предлагает больше лазеров (7 vs 5) и более высокую скорость сортировки (70K vs 60K событий/сек).
Традиционные сортеры (BD FACSAria Fusion, MoFlo Astrios EQ) превосходят по скорости или установленной базе, но ограничены 20-32 параметрами фильтровой детекции.
Ключевые технологии
CCD-спектральная детекция
Вместо традиционных ФЭУ с полосовыми фильтрами система использует CCD-матрицы, регистрирующие полный спектр эмиссии. Более 60 спектральных каналов дают высокое разрешение, позволяя различать флуорохромы с разницей в пиках эмиссии 10-15 нм.
Диапазон регистрации: 360-900 нм. Каждый лазер имеет выделенную группу CCD-каналов.
Спектральное размешивание (Spectral Unmixing)
Алгоритм разложения суммарного спектра на вклады отдельных флуорохромов. В отличие от классической компенсации (парная коррекция spillover), учитывается полная форма спектра каждого красителя.
Это критически повышает точность при панелях 30-40+ маркеров, где классическая компенсация становится нестабильной. Автофлуоресценция обрабатывается как отдельный спектральный компонент.
Лазерная система
| Лазер | Длина волны | Основные красители |
|---|---|---|
| УФ | 355 нм | BUV395, BUV496, BUV661 |
| Фиолетовый | 405 нм | BV421, BV510, BV605, BV711 |
| Синий | 488 нм | FITC, PerCP-Cy5.5, BB515 |
| Зелёный | 532 нм | PE, PE-тандемы (альтернатива 561) |
| Жёлто-зелёный | 561 нм | PE, PE-Cy5, PE-Cy7 |
| Оранжевый | 594 нм | mCherry, специализированные красители |
| Красный | 640 нм | APC, APC-Cy7, Alexa 700 |
До 7 лазеров - максимум среди коммерческих сортеров. Типичная конфигурация с 5 лазерами даёт возможность строить панели из 40+ маркеров.
Jet-in-air сортировка
Классический механизм: формирование капель, электростатическое отклонение. Скорость до 70 000 событий/сек. Сопла 70, 85, 100 мкм - выбор зависит от размера клеток.
| Режим | Ёмкости | Позиции |
|---|---|---|
| Пробирки | 1.5, 5, 15 мл | До 6 |
| Планшеты | 96-луночные, 384-луночные | 1 |
6-way сортировка даёт возможность выделить 4-6 различных типов иммунных клеток за один эксперимент.
Автоматизированная настройка потока
Программное управление давлением, автоматическая настройка drop delay и мониторинг стабильности струи. Снижает зависимость от квалификации оператора по сравнению с более ранними jet-in-air платформами.
Для кого подходит
- Высокопараметрическая иммунология - панели 30-40+ маркеров с последующей сортировкой целевых субпопуляций из одного образца
- Трансляционная онкология - сортировка редких популяций (стволовые клетки опухоли, антиген-специфичные T-клетки) из многопараметрически охарактеризованных образцов
- Иммунотерапия - характеристика и выделение специфических T-клеточных клонов по сложным фенотипам (тетрамер+, маркеры активации, маркеры истощения)
- Многоцветная геномика - сортировка 4-6 субпопуляций за один прогон для параллельного транскриптомного или эпигеномного анализа
- Гемопоэз - разделение множества стадий дифференцировки стволовых клеток
- Исследование опухолевого микроокружения - одновременная характеризация и выделение TIL, TAM, MDSC из одной пробирки
Особенности эксплуатации
ПО
Sasquatch - единая платформа для спектрального размешивания, построения гейтов, управления сортировкой и контроля качества. Визуализирует спектральные профили в реальном времени.
Данные экспортируются в формате FCS. Совместимость с FlowJo и другими программами анализа.
Установка
- Форм-фактор: крупная напольная система (шкаф + рабочая станция + ёмкости для жидкостей)
- Площадь помещения: не менее 15-20 м2
- Температура: стабильная, контролируемая
- Вытяжная вентиляция: обязательна
- Опциональный модуль аэрозольной защиты для биобезопасности
Обслуживание
Ежедневно: прогрев лазеров, калибровка drop delay, проверка выравнивания. Перед каждым экспериментом: запись референсных спектров (одноцветные контроли + контроль автофлуоресценции) - дополнительные 15-30 минут.
Расходные материалы: обжимающая жидкость (sheath fluid), калибровочные бусы, сопла. Спектральная детекция генерирует значительно большие объёмы данных - необходимо достаточное хранилище.
Обучение
Нужно оператор с опытом работы на jet-in-air платформах и базовым пониманием спектрального размешивания. Обучение у производителя - 3-5 дней. Полное освоение дизайна высокопараметрических панелей требует нескольких месяцев.
Ключевые навыки: подготовка одноцветных контролей, оценка матрицы размешивания, интерпретация residual spread, настройка drop delay.
Ограничения
- Крупная напольная система, требует выделенного помещения с вентиляцией
- Спектральные контроли (45+ пробирок для панели 40+ маркеров) требуют значительного объёма материала
- Стоимость владения высока: прибор, сервис, расходные материалы, инфраструктура хранения данных
- Спектральное размешивание при низких интенсивностях флуоресценции может вносить дополнительный шум
- Требует квалифицированного оператора с пониманием как jet-in-air сортировки, так и спектральных технологий
Области применения
Сравнение с аналогами
Aurora CS - главный конкурент Bigfoot в классе спектральных сортеров. Использует APD-детекторы вместо CCD, до 5 лазеров, скорость сортировки до 60 000 событий/сек. Aurora CS имеет более широкую установленную базу и развитое сообщество. Bigfoot предлагает больше лазеров (7 vs 5) и более высокую скорость (70K vs 60K).
FACSAria Fusion - традиционный jet-in-air сортер с дискретными фильтрами и ФЭУ-детекторами. До 5 лазеров, до 20 параметров, скорость до 70 000 событий/сек. Проверенная платформа с 20-летней историей. Bigfoot превосходит по числу маркеров (60+ vs 20), но требует более сложной подготовки (спектральные контроли, размешивание).
MoFlo Astrios EQ - самый быстрый традиционный сортер (100 000 событий/сек), до 7 лазеров и 32 параметров с дискретными фильтрами. Выбор при абсолютном приоритете скорости и крупных объёмов. Bigfoot проигрывает по скорости (70K vs 100K), но выигрывает по глубине мультипараметрического анализа.
Частые вопросы
В чём преимущество спектральной детекции перед традиционной при сортировке?
Спектральная детекция даёт возможность надёжно различать флуорохромы, которые невозможно разделить обычной компенсацией (например, BV510 и BV480). Это даёт возможность строить панели из 30-40+ маркеров и точнее идентифицировать целевые субпопуляции. Однако спектральное размешивание требует тщательной подготовки контролей и может вносить шум при низких интенсивностях.
Как Bigfoot соотносится по скорости с MoFlo Astrios EQ?
Bigfoot сортирует до 70 000 событий/сек, MoFlo Astrios EQ - до 100 000. Для большинства экспериментов (до 50-100 миллионов клеток) разница во времени составляет минуты. Bigfoot компенсирует меньшую скорость значительно более глубоким параметрическим анализом: 60+ спектральных каналов против 32 у Astrios EQ.
Нужна ли специальная подготовка оператора для работы со спектральным размешиванием?
Да, оператор должен понимать принципы спектрального размешивания, уметь оценивать качество референсных спектров и распознавать артефакты. Нужно обучение у производителя (3-5 дней) и опыт работы с любым спектральным цитометром. Ключевые навыки: подготовка одноцветных контролей, оценка матрицы размешивания, интерпретация residual spread.
Дополнительные материалы
Коды для госзакупок
Возможные коды ОКПД2 для закупки данного оборудования по 44-ФЗ и 223-ФЗ. Выбор кода зависит от назначения и контекста закупки.
Коды КТРУ регулярно обновляются Минфином и зависят от конкретных характеристик закупаемого оборудования (автоматическое/полуавтоматическое, с охлаждением/без и т.д.). Актуальные коды КТРУ доступны только в Единой информационной системе закупок.
Информация о кодах ОКПД2 носит справочный характер. Коды приведены в качестве примера возможных вариантов классификации данного оборудования. Выбор кода, его соответствие нормативно-правовым актам и целесообразность применения определяются заказчиком самостоятельно. ООО «Спин Аналитика» не несёт ответственности за некорректное применение указанных кодов при осуществлении закупочных процедур.